1.无菌箱或超净台
(1)无菌箱若无菌操作的工作量不大,可不利用无菌室杀菌后操作,而使用无菌箱。无菌箱置于洁净的房间内,也可放在无菌室。无菌箱由专业厂生产,其材质为有机玻璃。正面有2个手孔,上面装有袖套;左面有物料进出的孔,以转动孔门的螺纹而开闭;箱顶装有照明灯、紫外灯,并设装有过滤介质的通气柱。
(2)超净台设有一套空气层流装置。屋内的空气经预过滤器,由风机送人加压箱,再通过超细玻璃纤维后,进入均压层,以水平层流恒速流至操作区。
超净台由专业厂生产,有单人或双人操作2种,可按需选购。其气流速度为0.3~0.5m/s,空气净化率能达99. 95%以上,可放置于洁净的室内,使用时台上尽可能少放物品,以免干扰空气层流;也需定期检查无菌效果。超净台适用于酿酒酵母及细菌的操作,对于带孢子的霉菌则未必适用,因孢子经空气吹动会飞扬。
2.接种用具
接种用具为若干接种针及1盏酒精灯。
接种针由针部和杆部组成。针部可为23号铂丝,但其质地较软;也可用粗细适当的电炉丝代替,但在操作时应注意其散热较慢的特点。杆部可采用市售的金属接种棒,可将针部插入,用螺帽夹紧,也可随时取下针部;或以长20cm左右、粗细合适的铜棒为杆部,用小钻子在其一端中央钻1个小孔后,再将电炉丝插入孔内,然后用小锤砸牢;也有用玻璃作杆部的,将长约7cm的电炉丝的一端用镊子夹住,把另一端插入在酒精灯上加热而融软的玻璃棒内。以金属为杆部时,应在手握到的部位包以绝热材料。
针部的一端可做成直径约2mm的圆环,称为环状,常用于液态种子的微量移植;针端呈针状,常用于平板菌体与固态试管培养基或固态试管培养基与试管固态原菌之间的转接;针端呈钩状,一般用于转接固态的霉菌等菌丝体。使用后的接种针,可放人盛有酒精的量筒内。
若移植较多的液态菌体,则需无菌吸管。吸管的玻璃部分可预先用牛皮纸包好后进行干热灭菌;橡皮吸头部分,可泡于酒精内,待使用时取出。
3.高压灭菌锅
(1)小容量高压灭菌锅可以煤气或电等为热源。
(2)容量较大的高压灭菌锅 可用蒸汽为热源。可对在高压下不会有大变化的培养基及玻璃仪器进行灭菌。有芽孢的细菌,以70kPa的蒸汽灭菌20min,或98kPa的蒸汽灭菌15min,即可完全杀灭。
灭菌锅必须安装压力表和安全阀,安全阀要经常检查,以免生锈失效。在使用高压锅灭菌时,一定要将锅内的冷空气排尽,以免造成压力表的指示压力已到规定值而锅内温度较低的假象;灭菌结束后,要缓慢地或间歇式进行排气,以免降压太快而使液态培养基喷染棉塞。
通常每个厂应置备上述2种容量不同的高压灭菌锅,可根据平时的实际需要轮换使用。
若无高压灭菌锅,可用100℃的常压蒸汽灭菌3次,即1天1次。其原理是对于普通不形成芽孢的细菌,经100℃蒸汽灭菌30min即可全部杀灭;但芽孢杆菌则难以杀灭,然而第1次未杀死的芽孢杆菌,在30~37℃下,第2次即能变为营养体,可被第2次的常压蒸汽杀灭。如此3次常压灭菌,即可保证杀菌安全,称为间歇式灭菌法。
4.干热灭菌箱
干热灭菌箱设有双层门;有2组电热丝,分别用以升温和恒温;箱顶有气孔,若用于干燥,则应配有小的风机。使用时,应经常注意该设备的恒温装置是否失灵,以免升温过高而引起火灾。
将需灭菌的已塞棉塞的试管、三角瓶,或用牛皮纸包好的培养皿等玻璃用具,放入干热灭菌箱内,注意不要使棉塞或纸接触箱壁。以免棉塞和报纸发黄、燃烧或纸变脆而破裂。在灭菌过程或灭菌结束未降温时,不宜打开箱门,以免引起纸、棉塞燃烧和玻璃仪器破裂。
5.培养箱
培养箱又称恒温箱或保温箱,使用时也应经常注意温度控制系统是否失灵。
6.冰箱
冰箱用于存放菌种及无菌培养基,注意不要放液态而敞口的物品,以免液体蒸发,使菌种的棉塞受潮而容易污染杂菌。
7.显微镜
白酒厂所用的显微镜为光学显微镜,使用时应严格按说明书的内容操作。
上述设备及仪器的说明书,应由专人保管,别人借阅后须及时交还;或将说明书用粗线绳串起来,挂于安置设备或仪器的墙上,便于查阅。
8.玻璃器皿
(1)试管 不要使用翻口的试管。试管的长度通常为其直径的10倍。如18mm×180mm的试管,通常用于液态培养或盛倒平板用的固态培养基;15mm×150mm的试管,可装酵母和细菌培养用的斜面培养基;lOmm×lOOmm者,用于生理试验或保存原菌。
(2)培养皿 培养皿以其直径分为6cm、9cm、12cm、15cm、18cm、21cm等多种。
一般分离酵母或细菌时多使用直径为9cm培养皿,因其操作方便且不易污染杂菌;分离霉菌等产生大量菌丝及孢子的微生物时,可采用较大的培养皿。
(3)三角瓶又名锥形瓶。它以其容量定规格,应选用带有刻度的三角瓶。
(4)其他常用的载玻片,其大小为7.5cm x2.5cm×(0.1—0.13) cm;盖玻片为1.8cm×1.8cm,盖玻片有厚薄之分,薄片用于镜检,厚片用于血球计数计测细胞数。 涂布器:用于菌种分离及平板活菌计数时涂布平板培养基,可用直径为3—4mm、长25cm的玻璃棒,在酒精喷灯上将其一端弯成每边长为3cm的等边三角形,再把该三角形平面与柄弯成140°的角即可。