(1)磷酸-18-钨酸钠法
原理:乐果经水解后,其巯基乙酸和磷酸-18-钨酸钠作用而产生蓝色。
试剂:氢氧化钙粉末;磷酸-18-钨酸钠固体试剂(称取钨酸钠10g,溶于50mL蒸馏水中,加入7.5 mL 85%磷酸,通过冷凝管回流6h后,除去冷凝管,加入数滴溴水,使溶液呈棕黄色,再煮沸30min使颜色褪去,倒入蒸发皿中,加入25 g硅胶粉末搅拌均匀,置烘箱中烘干,所得白色粉末放入玻璃瓶中保存备用)。
操作方法:取酒样30 mL,加等量蒸馏水稀释,分别用氯仿20,15,10mL分3次提取,合并提取液于瓷蒸发皿中,挥去有机溶剂,残渣用2 mL蒸馏水洗下,放入试管中备用。
样品处理液于瓷反应板凹穴处,加入0.5~1g氢氧化钙粉末,用玻璃棒搅拌均匀,使呈明显碱性,放置1~2min。
加入磷酸-18-钨酸钠固体试剂0.5 g左右于上述样品中央,不要搅动,静置5 min,如呈现蓝色即证明有乐果存在。
(2)薄层色谱酶抑制法
原理:胆碱酯酶能分解乙酰胆碱和其他酸类。酶将乙酸β-萘脂分解,产生萘酚,萘酚和牢固蓝作用生成玫瑰色。但有机磷农药能抑制酶的活性,因而不产生萘酚,所以有农药斑点处不能形成玫瑰红。
试剂:薄层板(取硅胶5g,加蒸馏水10 mL,研磨均匀,涂制成0.25 mm厚度的薄板,阴干后于105℃下活化1h,置干燥器中备用);展开剂(苯+甲醇=9+1);喷雾剂(a.酶试剂。取新鲜鼠肝1份,于乳钵中研磨,陆续加水9份,制成匀浆。离心,取上清液注入消毒瓶中,置冰箱冷冻层保存,临时使用时,视其灵敏度稀释10~20倍。b.显色剂。甲液:称取乙酸萘脂125mg溶于100mL无水乙醇中;乙液:称取牢固蓝20mg溶于16 mL水中,现用现配。临用时取甲液4 mL加入乙液中,混匀后使用);标准有机磷溶液(用氯仿准确制成含有有机磷农药——敌敌畏、乐果各1mg/mL的溶液)。
操作方法:取标准有机磷溶液和样品液各5 mL,分别点板,置层析缸内,用10mL展开剂扩展至10cm处,取出挥干有机溶剂,喷酶试剂至薄板均匀湿润,置37%恒温水浴锅台面保温40 min,取出薄层板挥干,喷显色剂,数分钟后,在玫瑰红色的背景上,显出白色斑点,即表明有有机磷农药存在。本法的灵敏度为5×10-6 μg。
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